western blot,是从细胞或组织中提取蛋白质,电泳分离,blot到膜上,然后用抗体特异性识别标记要检测的蛋白,得到强特异性的信号。
western blot操作步骤:
1.细胞提取和蛋白分离
2.电泳分离蛋白
3.将蛋白blot到膜上(迁移)
4.不特异性蛋白和背景的消除,一般用酸性酒精、TBST、大鼠来源等抗体洗膜
5.与目的蛋白的抗体识别并通过二次抗体标记
6.增强信号(可选)
7.显色、成像或暴露胶片(目前应用较少)
western blot常用于蛋白质组学、生化研究中。western blot具有对样品的高特异性、定量性和灵敏度,对于检测蛋白质在复杂的组织和环境中的表达、识别相似蛋白等领域具有很大的应用空间。